• page_banner

Nieuws

Javascript is momenteel uitgeschakeld in uw browser.Sommige functies van deze website werken niet als JavaScript is uitgeschakeld.
Registreer u met uw specifieke gegevens en het specifieke medicijn van interesse, en we zullen de informatie die u verstrekt matchen met artikelen in onze uitgebreide database en u onmiddellijk een PDF-kopie e-mailen.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, afdeling Infectieziekten, eerste aangesloten ziekenhuis van de Universiteit van Suzhou, Suzhou City, provincie Jiangsu, 215000 Tel.tumoren van het spijsverteringsstelsel met een totale 5-jaarsoverleving van 14,1%.Veel patiënten met HCC worden in een vergevorderd stadium gediagnosticeerd, dus vroege screening is essentieel om de mortaliteit door HCC te verminderen.Naast veelgebruikte detectie-indicatoren zoals serum-alfa-fetoproteïne (AFP), lens-lectine-reactief alfa-fetoproteïne (AFP-L3) en abnormaal protrombine (vitamine K-deficiëntie-geïnduceerd proteïne II, PIVKA-II), vloeistofbiopsietechnieken Het is aangetoond dat het van diagnostische waarde is bij de detectie van HCC.In vergelijking met invasieve procedures kan een vloeistofbiopsie circulerende kwaadaardige metabolieten detecteren.Vloeistofbiopsietechnieken detecteren circulerende tumorcellen, circulerend tumor-DNA, circulerend RNA en exosomen en worden gebruikt voor vroege screening, diagnose en prognostische evaluatie van HCC.Dit artikel bespreekt de moleculaire biologie en toepassing van verschillende vloeistofbiopsietechnieken om veelbelovende biomarkers te isoleren die mogelijk haalbare opties zijn voor vroege beoordeling van HCC om vroege screening van HCC-groepen met een hoog risico te verbeteren.Trefwoorden: vloeistofbiopsietechniek, hepatocellulair carcinoom, risicogroep.
Hepatocellulair carcinoom (HCC) is een veel voorkomende kwaadaardige tumor van het spijsverteringskanaal en staat op de zesde plaats van nieuwe gevallen van kwaadaardige tumoren bij zowel mannen als vrouwen.1 Wereldwijd is leverkanker de derde belangrijkste doodsoorzaak door kanker na long- en colorectale kanker, goed voor 8,3% van de kankergerelateerde sterfgevallen als gevolg van alle kwaadaardige neoplasmata.1 De prognose van HCC hangt nauw samen met het stadium bij diagnose.De belangrijkste redenen voor een slechte overleving bij HCC zijn intrahepatische metastasen, portale veneuze tumortrombi en metastasen op afstand die resectie uitsluiten, en veel van deze kenmerken zijn al aanwezig bij patiënten op het moment van diagnose.
Op basis van diagnostische en behandelingsrichtlijnen zijn de belangrijkste risicofactoren voor het ontwikkelen van HCC levercirrose, chronische hepatitis B-virus (HBV) of hepatitis C-virus (HCV) infectie, alcoholische leververvetting en niet-alcoholische leververvetting (NAFLD). ).2 Daarnaast zijn risicofactoren voor HCC onder meer met aflatoxine besmette voedselinname, schistosomiasis, andere oorzaken van cirrose, een familiegeschiedenis van leverkanker, diabetes, zwaarlijvigheid, roken en door geneesmiddelen veroorzaakt leverletsel.35- en 45-jarige risicogroepen moeten regelmatig medisch worden gecontroleerd.Vroege screening is een belangrijke strategie voor vroege behandeling om de algehele overleving van patiënten met HCC te verbeteren.
Biomarkers zoals AFP, AFP-L3 en PIVKA-II worden aanbevolen voor vroege screening van HCC3,4.Vloeibare biopsietechnieken hebben veelbelovende resultaten opgeleverd bij vroege diagnose en evaluatie van de behandeling.5,6 Er is aanzienlijke vooruitgang geboekt in vloeibare HCC-biopsie, die mogelijk een hogere gevoeligheid en specificiteit heeft dan veelgebruikte serummarkers zoals AFP (tabel 1).
AFP is een veelgebruikte biomarker in HCC en is momenteel de meest gedetailleerde biomarker die veel wordt gebruikt voor vroege screening, diagnose en evaluatie van de ziekte.Een aanhoudend verhoogd AFP-niveau wordt beschouwd als een risicofactor voor de progressie van HCC.7,8 De detectiesnelheid van klein hepatocellulair carcinoom (sHCC) neemt toe met de ontwikkeling van echografie en computertomografie, en AFP is bijzonder ongevoelig gebleken voor de detectie van hHCC in de klinische praktijk.Volgens een retrospectief multicentrisch onderzoek9 werd AFP-positief gevonden in 46% (616/1338) van HCC-gevallen en 23,4% (150/641) van sHCC-gevallen.Bovendien zijn de AFP-spiegels verhoogd bij patiënten met chronische leverziekte en cirrose.10 AFP heeft dus een beperkt screeningseffect op sHCC.11 Volgens de Asia-Pacific Clinical Practice Guidelines for Hepatocellular Carcinoma wordt het gebruik van AFP niet aanbevolen.12 Klinisch bewijs suggereert dat PIVKA-II superieur is aan AFP bij de behandeling van HCC en dat de combinatie van PIVKA-II en AFP een hogere diagnostische waarde in HCC.13 Vergeleken met weefselbiopsie detecteert vloeistofbiopsie voornamelijk tumor-geassocieerde metabolieten in lichaamsvloeistoffen (bloed, speeksel, pleuravocht, hersenvocht of urine) en is het minder invasief voor weefsels.14 Bovendien kunnen vloeibare biopsieën kwaadaardige kenmerken weerspiegelen die niet aanwezig zijn in primair tumorweefsel.15 Vloeibare biopsieën worden nog niet in de klinische praktijk getest op alle soorten tumoren, maar hun diagnostische potentieel bij kanker trekt de aandacht van oncologen.16 Vloeistofbiopsie kan circulerende tumorcellen (CTC's), circulerend tumor-DNA (cDNA), circulerend vrij RNA (ecRNA) en exosomen detecteren.In dit artikel bespreken we de kenmerken, rol en toepassing van verschillende vloeistofbiopsietechnieken bij vroege screening van HCC-groepen met een hoog risico.
Extracellulair DNA (cfDNA) in bloedmonsters van gezonde individuen werd voor het eerst beschreven in 1948 door Mandel et al.17 cfDNA is een celvrij DNA-fragment van ongeveer 160-180 bp lang, voornamelijk afkomstig van lymfocyten en myeloïde cellen.ctDNA is een specifiek mutant DNA-fragment dat door tumorcellen in het perifere bloed wordt afgegeven en dat de genomische informatie van tumorcellen vertegenwoordigt na bepaalde pathofysiologische processen, waaronder necrose, apoptose en uitscheiding.Het aandeel van ctDNA in totaal cfDNA varieert sterk met het tumortype, en naar verluidt zijn cDNA-fragmenten doorgaans minder dan 167 bp lang.18 Uit het onderzoek van Underhill bleek dat cfDNA-fragmenten over het algemeen korter zijn dan normaal cfDNA.19 In vergelijking met gezonde individuen is de totale lengte van cfDNA-fragmenten in het bloed van kankerpatiënten korter, zodat cfDNA kan worden gebruikt als indicator voor vroege tumorscreening.Verrijking van bepaalde subsets van cfDNA-fragmentlengtes kan de detectie van cDNA dat is geassocieerd met niet-metastatische solide tumoren verbeteren.Studies hebben aangetoond dat ctDNA wordt aangetroffen in meer dan 75% van de gevorderde pancreas-, colon-, blaas-, gastro-intestinale kankers, lever-, eierstok-, borst-, melanoom- en hoofd- en nekkankers.20,21 De hoeveelheid ctDNA in het bloed is echter afhankelijk van de locatie van de tumor.22 In een onderzoek van Bettegoud bleken patiënten met colorectaal-, borst-, lever-, long- en prostaatkanker hogere cDNA-waarden in hun bloed te hebben dan andere kankers.Daarentegen was bij patiënten met mondkanker, pancreaskanker, maagkanker en glioom de cDNA-concentratie in het bloed lager.eenentwintig
Omdat ctDNA dezelfde genetische mutaties bevat als primaire tumorcellen, kan cDNA worden gebruikt om heterogene tumorspecifieke mutaties en epigenetische veranderingen te detecteren, waaronder methylering, hydroxymethylering, variaties van enkelvoudige nucleotiden en variaties in kopienummers.drieëntwintig
DNA-methylatie is een van de meest voorkomende epigenetische veranderingen die leidt tot genrepressie.Vergeleken met normale cellen zijn er verschillen in het algehele niveau van methylering van het tumorcelgenoom, vooral in de methylering van tumorsuppressorgenen, die in een vroeg stadium kunnen worden gedetecteerd, wat suggereert dat veranderingen in DNA-methylering een indicator kunnen zijn van vroege detectie van tumorigenese.Tumorsuppressorgenen geassocieerd met HCC kunnen worden geïnactiveerd door promotormethylering, waardoor tumorigenese wordt gestimuleerd.24 DNA-methylatie is een ideale marker voor de vroege diagnose van tumoren vanwege de weefselspecificiteit, detecteerbaarheid en leeftijdsonafhankelijkheid.Bovendien komt DNA-methylatie vaker voor in vergelijking met somatische mutaties omdat er meer doelgebieden en verschillende veranderde CpG-plaatsen in elk gebied van het doelgenoom zijn.25 Naast meerdere CpG-sites is een groot aantal onafhankelijke gehypermethyleerde loci in ctDNA geïdentificeerd in DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 en RGS10.26 Xu et al.Bij vergelijking van cfDNA-monsters van 1098 HCC-patiënten en 835 gezonde controles bleek dat genen geassocieerd met HCC sterk correleren met de overeenkomstige plasma-cDNA-methyleringssignaturen.25 Op basis van laboratoriumanalyse is een voorspellend model ontwikkeld met 10 methylatiemarkers met een sensitiviteit en specificiteit van respectievelijk 85,7% en 94,3%, en deze markers waren sterk gecorreleerd met tumormassa, tumorstadium en respons op behandeling.Deze resultaten geven aan dat het gebruik van cDNA-methylatiemarkers veelbelovend is bij de diagnose, monitoring en prognose van HCC.In een methyleringsmodel bestaande uit drie afwijkend gemethyleerde genen (APC, COX2, RASSF1A) en één miRNA (miR203) gepresenteerd door Lu et al , waren de gevoeligheid en specificiteit van model 27 voor het diagnosticeren van HBV-geassocieerde HCC vergelijkbaar.80%.Bovendien kon het model 75% van de niet-gediagnosticeerde HCC-patiënten detecteren met een AFP-niveau van 20 ng/ml.Het gen voor het Ras-geassocieerde domeinfamilie 1A-eiwit (RASSF1A) is de belangrijkste repetitieve DNA-sequentie in het menselijk genoom.Araujo et al.concludeerde dat hypermethylering van de RASSF1A-promotor een waardevolle biomarker zou kunnen zijn voor vroege screening van HCC en een potentieel moleculair doelwit voor epigenetische therapie.28 In één onderzoek werd hypermethylering van de serum-RASSF1A-promotor gevonden bij 73,3% van de patiënten met HCC.29 Long interspersed nucleotide element 1 (LINE-1) is een andere zeer actieve retrotranspositiemediator.Hypomethylering van LINE-1 werd gevonden in het DNA van 66,7% van de HCC-serummonsters en ging gepaard met vroeg recidief en slechte overleving na radicale resectie.29 Hypermethylering is een algemeen genetisch proces dat een unieke rol speelt bij de ontwikkeling van levercirrose en HCC.30 Hydroxymethylering daarentegen is een demethyleringsproces dat de reactivering en expressie van genen induceert, en de detectie van het 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC)-product in dit proces kan worden gebruikt om een ​​tumor te identificeren.Methylering en hydroxymethylering van cDNA zijn geassocieerd met tumorigenese en kunnen bijdragen aan de vroege screening van HCC.In een onderzoek onder 2554 proefpersonen werden 31 genoombrede 5-hmC's gevonden in cfDNA-monsters en 32 genen werden geïdentificeerd door 5-hmC-sequenties te vergelijken bij HCC-patiënten en risicogroepen zoals die met chronische ziekten.Diagnostische modellen van leverziekten.en cirrose.Dit model was superieur aan AFP in het onderscheiden van HCC van niet-tumorweefsel.
Mutaties in coderende regio's kunnen leiden tot transcriptionele afwijkingen, wat kan leiden tot veranderingen in eiwitsequenties en uiteindelijk tot kanker.Varianten van één nucleotide zijn belangrijke genomische markers voor vroege tumorscreening vanwege hun hoge weefselbetrouwbaarheid en hoge tumor- en weefselspecificiteit.Talrijke HCC-gerelateerde onderzoeken die gebruik maken van next generation sequencing (NGS) voor exoom- en volledige genoomsequencing van kanker hebben gemeenschappelijke gemuteerde cellulaire genen geïdentificeerd, zoals TP53 en CTNNB1, evenals verschillende, waaronder ARID1A, MLL, IRF2.De nieuwe genen, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 en JAK1 vertonen matige mutatiesnelheden. Mutant genfunctie-analyse suggereert dat veranderingen in chromatine-remodellering, Wnt/β-catenine en JAK/STAT-signaaltransductie, de P53-celcyclusroute, epigenetische modifiers, oxidatieve stressroutes, de PI3K/AKT/MTOR-route en de RAS/RAF/ MAPK-kinaseroute speelt een cruciale rol bij HCC-oncogenese.32,33 In een onderzoek waarin tumor-geassocieerde mutaties werden gedetecteerd, ontdekten Huang et al dat de frequentie van tumor-geassocieerde mutaties die afhankelijk zijn van ctDNA 19,5% was en de specificiteit 90% was. .34 Bovendien hadden patiënten die een vasculaire invasie doormaakten meer kans op ctDNA-mutaties (P=0,041) en een kortere recidiefvrije overleving (P<0,001). Mutant genfunctie-analyse suggereert dat veranderingen in chromatine-remodellering, Wnt/β-catenine en JAK/STAT-signaaltransductie, de P53-celcyclusroute, epigenetische modifiers, oxidatieve stressroutes, de PI3K/AKT/MTOR-route en de RAS/RAF/ MAPK-kinaseroute speelt een cruciale rol bij HCC-oncogenese.32,33 In een onderzoek waarin tumor-geassocieerde mutaties werden gedetecteerd, ontdekten Huang et al dat de frequentie van tumor-geassocieerde mutaties die afhankelijk zijn van ctDNA 19,5% was en de specificiteit 90% was. .34 Bovendien hadden patiënten die een vasculaire invasie doormaakten meer kans op ctDNA-mutaties (P=0,041) en een kortere recidiefvrije overleving (P<0,001).Mutant genfunctie-analyse suggereert dat veranderingen in chromatine-remodellering, Wnt/β-catenine en JAK/STAT-signalering, P53-celcyclusroute, epigenetische modificatoren, oxidatieve stressroutes, PI3K/AKT/MTOR-route en RAS/RAF/MAPK-kinaseroute spelen een cruciale rol in HCC-tumorigenese.32,33 In een onderzoek dat tumor-geassocieerde mutaties vond, Huang et al.vond dat de frequentie van ctDNA-afhankelijke tumor-geassocieerde mutaties 19,5% was en de specificiteit 90%..34 оме того, у пациентов с сосудистой инвазией аще встречались мутации цДНК (P=0,041) и более короаткацидивнезреаяиивнезреаиивнезре .34 Bovendien hadden patiënten met vasculaire invasie meer cDNA-mutaties (P=0.041) en een kortere ziektevrije overleving (P<0.001).Functionele analyse van de mutante genen onthulde chromatine-remodellering, Wnt/β-catenine en JAK/STAT-signalering, de P53-celcyclusroute, epigenetische modificatoren, de oxidatieve stressroute, de PI3K/AKT/MTOR-route en de RAS/RAF/MAPK kinaseroute spelen een cruciale rol bij de oncogenese van HCC. 32,33 Huang ctDNA 的频率为19.5%,特异性为90% .34 ctDNA突变(P=0.041)和更短的无复发生存期(P<0.001)。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% , 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变(P=0.041)和更短的无复发生存期(P<0,001)。32,33 In een studie die tumor-geassocieerde mutaties vond, Huang et al.vond dat tumor-geassocieerde mutaties 19,5% afhankelijk waren van cDNA met een specificiteit van 90% 34. Bovendien hadden patiënten die een vasculaire invasie hadden ondergaan meer kans om cDNA te ontwikkelen.ация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutatie (P=0.041) en kortere ziektevrije overleving (P<0.001).Een ander veel voorkomend HCC-drivergen is TP53, dat een mutatiesnelheid van meer dan 30% heeft.Studies hebben aangetoond dat de frequentie van TP53-mutaties in ctDNA in bloed en urine varieert van 5% tot 60%.35 Johan's onderzoek toonde aan dat het ctDNA-mutatiespectrum in late HCC een vergelijkbare mutatiesnelheid heeft als vroege HCC, inclusief de TERT-promotor (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutaties in AXIN1 ., ARID2, KMT2D en TSC2 (elk 6%).36 Het β-catenine (CTNNB1) oncogen speelt een belangrijke rol in de Wnt-signaleringsroute.De transcriptie-coactivator CTNNB1 kan genexpressie bevorderen, wat kan leiden tot celproliferatie, remming van apoptose en angiogenese.CTNNB1 kan ook interageren met TERT om hepatocyttransformatie te induceren.33 De TERT-promoter is vaak gemuteerd in sommige solide tumoren.Veranderingen in TERT, een van de vroegste genetische veranderingen in kwaadaardige transformatie van HCC, kunnen leiden tot telomerase-reactivering in cirrotische hepatocyten en kunnen proliferatie bevorderen en veroudering voorkomen.Mutaties in de 33-37 TERT-promoter zijn gemeld bij 59-90% van de patiënten met proliferatieve leverknobbeltjes en vroege HCC en zijn geassocieerd met overleving.38
Copy number changes (CNA) zijn een belangrijk subtype van somatische mutaties.Onderzoek heeft aangetoond dat de wijdverbreide en focale belasting van CNA een genomische signatuur is die in staat is om tumor-immuuninfiltratie en -uitsluiting bij sommige soorten kanker te voorspellen.39 Actieve infiltratiesignalering, hoge cytolytische activiteit, ernstige ontsteking en genetische markers geassocieerd met antigeenpresentatie in HCC.Analyse van de data-array van single-nucleotide polymorfismen bij 477 proefpersonen onthulde een lage belasting van het CZS.Daarentegen vertoonden chromosomaal onstabiele tumoren met een hoge uitgebreide CNA-belasting tekenen van immuunafstoting en werden geassocieerd met proliferatie, DNA-herstel en TP53-disfunctie.Xu et al.toonde aan dat de HCC-groep hogere CNA-scores had dan de chronische leverziektegroep.Met behulp van sequentiebepaling van het hele genoom van een enkele cel, bleken CNA's vroeg in de hepatocarcinogenese te verschijnen en relatief stabiel te blijven tijdens tumorprogressie.41 Chung et al.vond dat cfDNA-niveaus significant verhoogd waren bij HCC-patiënten en dat genoombrede CNA's in cfDNA een belangrijke onafhankelijke prognostische marker waren bij HCC-patiënten die werden behandeld met sorafenib.42 Patiënten met een hogere CNA-last hadden meer kans op ziekteprogressie en overlijden dan patiënten met een lagere CNA-last.Ollerich et al.ontdekte dat de kopie-nummerinstabiliteitsindex (CNI) kan worden gebruikt om CNA in cfDNA van kankerpatiënten te beoordelen.Ze merkten op dat patiënten met gevorderde kanker significant hogere CNI-scores hadden dan een controlegroep, die de respons van de patiënt op systemische chemotherapie en immunotherapie beoordeelt.43 Deze resultaten suggereren dat CNA's gevonden in vloeibare biopsiespecimens kunnen dienen als prognostische indicatoren bij patiënten met gevorderde kanker.HCC op de achtergrond van systeemtherapie.
Momenteel kunnen de methoden die worden gebruikt om ctDNA te detecteren, worden onderverdeeld in gerichte en niet-gerichte methoden.Kortom, gerichte methoden zoals digitale polymerasekettingreactie (dPCR), BEAMing digitale PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq en Tam-Seq zijn zeer gevoelig voor vooraf gedefinieerde genen.Off-target methoden zoals whole genome sequencing en NGS bieden een uitgebreid beeld van het gehele genomische landschap.44 In vergelijking met targetpanels kan sequencing van het hele genoom niet alleen puntmutaties en inserties detecteren, maar ook herschikkingen en variaties in kopienummers.prognose, en CTC en cfDNA zijn goede indicatoren die kunnen worden gebruikt voor dynamische monitoring van HCC.45 Bovendien kan cfDNA-analyse nuttiger zijn bij het detecteren van HCC.Yan et al.toonde aan dat cfDNA in het plasma van patiënten met HCC significant hoger was dan bij patiënten met leverfibrose en gezonde controles.In vergelijking met AFP wordt verwacht dat ctDNA een betere screeningsmarker is voor vroege HCC.46 In een prospectieve studie van 47 vloeibare biopsieën die cfDNA en eiwit in een populatie testten, werd aangetoond dat ze effectief waren in het onderscheiden van patiënten met HCC van patiënten zonder HCC.In een follow-up van 331 echografie-normale en AFP-negatieve patiënten waren de sensitiviteit en specificiteit van cfDNA voor het diagnosticeren van HCC respectievelijk 100% en 94%, zodat cDNA HCC kon detecteren bij asymptomatische HBsAg-seropositieve individuen.In de Yeo48-studie werd een hoge frequentie (92,5%) van hypermethylering van de RASSF1A-promotor gevonden bij patiënten met HCC.Bovendien, Xu et al.creëerde een diagnostisch model om HCC te voorspellen met behulp van een panel van specifieke methylatiemarkers met een specificiteit en gevoeligheid van respectievelijk 90,5% en 83,3%.Met het panel kunnen patiënten met HCC worden onderscheiden van patiënten met andere leverziekten, wat beter is dan AFP.Ze ontdekten ook dat normale controles die positief testten, risicofactoren voor HCC kunnen hebben, zoals HBV-infectie of een voorgeschiedenis van alcoholgebruik.25 We veronderstellen dat hoogrisicofactoren voor HCC hypermethylering van cfDNA kunnen bevorderen, wat vervolgens bijdraagt ​​aan de progressie van HCC, en dat cfDNA dus een sleutelrol kan spelen bij screening op risicogroepen.Cai et al.het volledige scala van ctDNA-mutaties samenvatten en een robuuste strategie bieden voor het beoordelen van de tumorlast bij patiënten.49 Deze strategie kan tumorigenese identificeren een mediaan van 4,6 maanden vóór beeldverandering en heeft superieure diagnostische prestaties laten zien in vergelijking met serumbiomarkers AFP, AFP-L3 en PIVKA-II.De diagnostische waarde van cDNA-testen is aangetoond wanneer beeldevaluatie niet beschikbaar is, dus cDNA-testen zijn van waarde bij de diagnose van vroege HCC bij risicogroepen.Onlangs hebben wetenschappers NGS-technologie gebruikt om indicatoren van multivariate genetische variatie (inclusief 5-hydroxymethylcytosine, 5′-motief, fragmentatie, nucleosoomspoor, HIFI) in 3204 klinische monsters en cfDNA te analyseren.50 Opnieuw gevalideerde HIFI-modellen met drie onafhankelijke trein-, test- en testsets lieten een stabiel en betrouwbaar onderscheid zien tussen HCC- en niet-HCC-populaties met respectievelijk 95,79% en 95,42% gevoeligheid in HCC-specifieke tests en testsets.De geslachten waren respectievelijk 95,00% en 97,83%.De diagnostische waarde van de HIFI-methode is hoger dan die van AFP bij het onderscheiden van HCC van cirrose.Daarnaast wordt ctDNA ook gebruikt bij chirurgische behandelingen.Atsushi et al.bepaalde de preoperatieve serumspiegels van ctDNA bij patiënten met HCC en vond dat het recidiefpercentage en de extrahepatische metastasesnelheid in de cDNA-positieve groep significant hoger waren dan in de cDNA-negatieve groep, en cDNA-niveaus waren significant gecorreleerd.met tumorprogressie.51 Omdat het een zeer gevoelige biomarker is, kan ctDNA het vermogen van HCC om bloedvaten binnen te dringen voorspellen.Wang et al.voerde volledige genoomsequencing uit van 46 patiënten met HCC, en multivariate analyse toonde aan dat de drempelwaarde van de allelfrequentie van de cDNA-variant voor invasie in microvaten 0,83%, gevoeligheid 89,7% en specificiteit 80,0% is.een onafhankelijke risicofactor voor microvasculaire invasie in resectabel HCC, wat suggereert dat cDNA kan helpen bij het begeleiden van een optimale behandeling.Concluderend, ctDNA is volledig betrokken bij het optreden en de ontwikkeling van HCC en kan worden gebruikt voor vroege screening, chirurgische evaluatie en ziektemonitoring.
CTC's zijn kwaadaardige cellen die zijn afgeleid van primaire tumoren of metastasen die uitzaaien naar de bloedbaan.Tumorcellen scheiden matrixmetalloproteïnasen (MMP's) af, die het basaalmembraan afbreken, waardoor tumorcellen direct in de bloed- en lymfevaten kunnen komen.De meeste CTC's worden echter snel geëlimineerd door anoikis, immuunaanvallen of schuifspanning.53 Dankzij de epitheliale-mesenchymale overgang (EMT) kunnen CTC's gemakkelijk worden geïsoleerd uit het primaire tumorweefsel, capillairen binnendringen en een significant verbeterde overleving, metastase, invasiviteit en resistentie tegen geneesmiddelen verwerven.Studies hebben aangetoond dat er een grote heterogeniteit is tussen de verschillende tumorcellen in primaire gemetastaseerde tumoren.Zo kan CTC-analyse leiden tot een uitgebreid begrip van de heterogeniteit van tumorcellen.54
Specifieke markers voor HCC-geassocieerde CTC's omvatten glypican-3 (GPC3), asialoglycoproteïnereceptor (ASGPR), epitheelceladhesiemolecuul (EpCAM) en stamcel-geassocieerde markers zoals CD44, CD90, 55 en intercellulair adhesiemolecuul 1 (ICAM1).) .56 De GPC3-marker is een celmembraan-verankerd eiwit dat klinisch wordt gebruikt voor pathologische analyse en karakterisering van HCC.57 Expressie van GPC3 komt vaker voor in HCC-tumorcellen met intermediaire en lage differentiatie en bevordert extrahepatische migratie;bovendien duidt de aanwezigheid van GPC3+ CTC's op gemetastaseerd HCC.58 ASGPR is een transmembraaneiwit dat alleen tot expressie wordt gebracht op het oppervlak van hepatocyten en wordt sterk tot expressie gebracht in goed gedifferentieerde HCC.EpCAM is een van de meest gebruikte membraan-geassocieerde eiwitten om CTC's te vangen.EpCAM is geïdentificeerd als een oppervlaktemarker van HCC-cellen met stamcelkenmerken59, wat correleert met verschillende klinisch-pathologische kenmerken van HCC, zoals vasculaire invasie, beoordeelde AFP-niveaus en vergevorderd stadium van leverkanker in het Barcelona Hospital (BCLC).Het 60 CTC EMT-fenotype is sterk gemetastaseerd.54 EMT-processen in de CTC bevorderen HCC-metastase.Expressie van EMT-markers zoals vimentine, twist, E-box zinkvingerbinding (ZEB) 1, ZEB2, slak, slak en E-cadherine zijn onderzocht in lever-afgeleide CTC's van HCC-patiënten.58 Het CanPatrol™-systeem, ontwikkeld door Cheng [61], classificeerde CTC's in drie fenotypische subgroepen op basis van voornamelijk tot expressie gebrachte markers: epitheliaal fenotype (EpCAM, CK8/18/19), mesenchymaal fenotype (vimentine, opgerold) en gemengde fenotypes.Bij 176 patiënten was de totale CTC superieur aan AFP bij het onderscheiden van HCC van goedaardige leverziekte.De AUC-waarden voor totale CTC, AFP en gecombineerde totale CTC en AFP waren 0,774 (95%-BI, 0,704-0,834), 0,669 (95%-BI, 0,587-0,750) en 0,821 (95%-BI 0,756-0,886). ).), respectievelijk.CTC-classificatie op basis van EMT kan HCC-diagnose, vroege herhaling, metastase en kortere totale tijd voorspellen.
Momenteel omvatten methoden voor het detecteren van CSC's fysieke methoden en biologische methoden.Fysische methoden, vaak verrijking genoemd op basis van biofysische eigenschappen, zijn voornamelijk afhankelijk van de fysieke eigenschappen van de CSC, zoals grootte, dichtheid, lading, mobiliteit en vervormbaarheid.Afhankelijk van de fysische eigenschappen zijn er verschillende methoden zoals op filtratie gebaseerde systemen, diëlektroforese, enz. Deze laatste, ook bekend als op immunoaffiniteit gebaseerde verrijking, is voornamelijk gebaseerd op antigeen-antilichaambinding omdat de methode gebruik maakt van antilichamen tegen tumorspecifieke biomarkers zoals EpCAM, ASGPR, menselijke epidermale groeifactorreceptor 2 (HER2), prostaatspecifiek antigeen (PSA), menselijk pancytokeratine (P-CK) en carbamoylfosfaatsynthase 1 (CPS1).62 Een ander type, de niet-verrijkingsmethode genoemd, gebruikt flowcytometrie om CTC's te onderscheiden van leukocyten op basis van een hogere kern-tot-cytoplasmatische verhouding en grootte.Momenteel is de enige door de FDA goedgekeurde test voor de detectie van CTC's het Cell-Search™-systeem, dat gebruikmaakt van de EpCAM-celoppervlakmarkering. Gecombineerde, op markers gebaseerde CTC-detectie zou echter het positiviteitspercentage kunnen verhogen.54 Een mengsel van antilichamen tegen ASGPR en CPS1 bereikte een CTC-detectiepercentage van 91% bij HCC-patiënten.63 Zhang et al. gebruikten een CTC-chip met antilichamen tegen ASGPR, P -CK en CPS1 en onderscheidde HCC-patiënten van die met goedaardige leverziekte of niet-HCC-kanker met een snelheid van 100%.64 Een onderzoek van Wang ontdekte EpCAM+ CTC's bij 60% van 42 HCC-patiënten en vond significante correlaties tussen beide positiviteit en het aantal CTC's met TNM-stadium.65 Guo et al vonden dat een CTC-afgeleide PCR-score verhoogd was bij 125/171 (73%) patiënten bij wie het AFP-niveau <20 ng/ml was met een gevoeligheid van 72,5% en een specificiteit van 95,0%, vergeleken met 57,0% en 90,0% voor AFP bij een grenswaarde van 20 ng/ml.66 De combinatie van AFP en CTC's kan de HCC-detectie verbeteren.45 Er wordt aangenomen dat CTC's een voordeel hebben ten opzichte van AFP bij vroege screening van groepen met een hoog risico op HCC. Gecombineerde, op markers gebaseerde CTC-detectie zou echter het positiviteitspercentage kunnen verhogen.54 Een mengsel van antilichamen tegen ASGPR en CPS1 bereikte een CTC-detectiepercentage van 91% bij HCC-patiënten.63 Zhang et al. gebruikten een CTC-chip met antilichamen tegen ASGPR, P -CK en CPS1 en onderscheidde HCC-patiënten van die met goedaardige leverziekte of niet-HCC-kanker met een snelheid van 100%.64 Een onderzoek van Wang ontdekte EpCAM+ CTC's bij 60% van 42 HCC-patiënten en vond significante correlaties tussen beide positiviteit en het aantal CTC's met TNM-stadium.65 Guo et al vonden dat een CTC-afgeleide PCR-score verhoogd was bij 125/171 (73%) patiënten bij wie het AFP-niveau <20 ng/ml was met een gevoeligheid van 72,5% en een specificiteit van 95,0%, vergeleken met 57,0% en 90,0% voor AFP bij een grenswaarde van 20 ng/ml.66 De combinatie van AFP en CTC's kan de HCC-detectie verbeteren.45 Er wordt aangenomen dat CTC's een voordeel hebben ten opzichte van AFP bij vroege screening van groepen met een hoog risico op HCC.Echter, op marker gebaseerde gecombineerde detectie van CTC's kan het percentage positieve resultaten verhogen.54 Een mengsel van anti-ASGPR- en CPS1-antilichamen bereikte een CTC-detectiepercentage van 91% bij patiënten met HCC.63 Zhang et al.gebruikte een CTC-Chip met antilichamen tegen ASGPR, P-CK en CPS1 en onderscheidde ook patiënten met HCC van die met goedaardige leverziekte of niet-HCC met een snelheid van 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге . frequentie en aantal CTC's met TNM-stadium.65 Guo et al vonden dat de PCR afgeleid van CTC's verhoogd was bij 125/171 (73%) patiënten met AFP-waarden <20 ng/ml met een sensitiviteit van 72,5% en een specificiteit van 95,0% vergeleken met 57,0% en 90,0% voor AFP bij een afkapwaarde van 20 ng/ml.66 De combinatie van AFP en CTC's kan de detectie van HCC verbeteren.45 CTC's worden geacht een voordeel te hebben ten opzichte van AFP bij vroege screening groepen.met een hoog risico op HCC.Echter, op marker gebaseerde gecombineerde detectie van CTC's kan het percentage positieve resultaten verhogen.54 Een mengsel van anti-ASGPR- en CPS1-antilichamen bereikte een CTC-detectiepercentage van 91% bij patiënten met HCC.63 Zhang et al.gebruikte CTC-chips met antilichamen tegen ASGPR, P-CK en CPS1 en onderscheidde patiënten met HCC van goedaardige leverziekte en niet-HCC met 100%.64 Wang's onderzoek identificeerde 60% van de EpCAM+ CTC's bij 42 HCC-patiënten en vond een significante correlatie tussen incidentie en aantal CTC's in het TNM-stadium. 65 Guo 等人发现,在AFP 水平<20 ng/ml 的125/171 (73%) 名患者中,CTC 衍生的PCR 评分升高,敏感性为72,5%,特异性为95,0%,而AFP 在截止值为20 ng/ml 时的特异性为57,0% 和90,0%。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 , , ctc 衍生 pcr 评分 , 敏感性 为 为 72,5%, 为 95,0%, AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值为20ng/ml 时的特异性为57,0% 和90,0%。65 Guo et al.обнаружили, о у 125/171 (73%) ациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, олученные с омощью ЦОК, были повышены с чувствительноиствительноиствительноиствительноисительно отсечки ецифичность составляла 20 нг/мл. vond dat bij 125/171 (73%) patiënten met AFP-niveaus <20 ng/ml, CTC-afgeleide PCR-waarden verhoogd waren met een sensitiviteit van 72,5% en een specificiteit van 95,0%, terwijl AFP op cut-off specificiteit was was 20 ng/ml.ml was 57,0% en 90,0%.66 De combinatie van ORP en CTC verbetert de detectie van HCC.Van 45 CTC's wordt gedacht dat ze superieur zijn aan AFP bij vroege screening van HCC-populaties met een hoog risico.Voor CTC-positieve en HCC-groepen met een hoog risico moeten CTC-tests dus routinematig worden gecombineerd met echografie en AFP-detectie.CTC's worden echter beschouwd als belangrijke voorspellers van tumormetastase en recidief, en detectie van CTC's wordt niet onafhankelijk aanbevolen als diagnostisch hulpmiddel.62 Daarom kan CTC dienen als een betere voorspellende biomarker dan andere momenteel gebruikte markers. Zhou et al vonden dat patiënten met verhoogde aantallen EpCAM+ CTC's en regulerende T-cellen een hoger risico vertoonden op het ontwikkelen van HCC-recidief dan patiënten met lage aantallen CTC's, met een recidiefratio van 66,7% versus 10,3% (P <0,001).67 Een soortgelijk onderzoek werd gerapporteerd door Zhong et al.68 Bovendien ontdekte Qi dat 101 van de 112 patiënten (90,81%) met HCC, inclusief degenen met een vroege ziekte, positief waren voor CTC's en dat zeer kleine HCC-knobbeltjes werden gedetecteerd na 3 tot 5 maanden follow-up. Zhou et al vonden dat patiënten met verhoogde aantallen EpCAM+ CTC's en regulerende T-cellen een hoger risico vertoonden op het ontwikkelen van HCC-recidief dan patiënten met lage aantallen CTC's, met een recidiefratio van 66,7% versus 10,3% (P <0,001).67 A vergelijkbaar onderzoek werd gerapporteerd door Zhong et al.68 Bovendien ontdekte Qi dat 101 van de 112 patiënten (90,81%) met HCC, inclusief degenen met een vroege ziekte, positief waren voor CTC's en dat zeer kleine HCC-knobbeltjes werden gedetecteerd na 3 tot 5 maanden follow-up. оу en .обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al vonden dat patiënten met verhoogde EpCAM+ CTC's en regulerende T-cellen een hoger risico hadden op HCC-recidief dan die met lage CTC's, met een recidiefpercentage van 66,7% versus 10,3% (P<0,001)67.Een soortgelijk onderzoek werd uitgevoerd door Zhong et al.68. Bovendien ontdekte Qi dat 101 van de 112 patiënten (90,81%) met HCC, inclusief degenen met vroege ziekte, CTC's hadden en dat zeer kleine HCC-knobbeltjes werden gedetecteerd na 3 tot 5 maanden follow-up. Zhou 等人发现,与CTC 数量较少的患者相比,EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高,复发率分别为66,7% 和10,3% (P <0,001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 , epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 , 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 ( 为 为 10.3% p <0,001)。。。。。。。。。。。。。。。 оу en .обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.vonden dat patiënten met verhoogde EpCAM+ CTC's en regulerende T-cellen een hoger risico hadden op HCC-recidief in vergelijking met patiënten met minder CTC's, met recidiefpercentages van respectievelijk 66,7% en 10,3% (P <0,001).Een soortgelijk onderzoek werd gerapporteerd door Zhong et al.68 Bovendien ontdekte Qi dat 101 van de 112 HCC-patiënten (90,81%), inclusief patiënten met vroege ziekte, positieve CTC-resultaten hadden en zeer kleine HCC-knobbeltjes vonden na 3 bezoeken.Observatie tot 5 maanden.Ze vonden ook CTC's bij 12 patiënten met chronische HBV-infectie en vonden binnen 5 maanden kleine HCC-tumoren bij 2 CTC-positieve patiënten.69 CTC's kunnen dus worden gebruikt om HCC te voorspellen, 70 maar ze kunnen meer routinematig worden gebruikt als voorspellende biomarkers.
Net als cfDNA wordt cfRNA via verschillende systemen in de bloedbaan afgegeven.Deze moleculen in het perifere bloed vertegenwoordigen het kankerweefsel van oorsprong.Vergeleken met markers die worden gedetecteerd door niet-invasieve methoden, zijn cfRNA's dynamischer gereguleerd, weefselspecifiek en overvloedig aanwezig in de extracellulaire omgeving.De significantie en diagnostische waarde van 71 miRNA's (miRNA's) in HCC is in veel onderzoeken gerapporteerd.miRNA's zijn endogene niet-coderende RNA's (ncRNA's) die verschillende moleculair biologische activiteiten reguleren door de translatie van doelboodschapper-RNA's (mRNA's) te remmen.miRNA's bevinden zich in apoptotische lichamen ingekapseld in exosomen, maar ze kunnen ook stabiel binden aan serumeiwitten en lipiden in perifeer bloed en kunnen worden gebruikt om HCC te evalueren.microRNA's zijn betrokken bij leverregeneratie, lipidenmetabolisme, apoptose, ontsteking en de ontwikkeling van HCC.72 Oncogene miRNA's zoals miR-21, miR-155 en miR-221 zijn bekend in HCC.In het bijzonder speelt miR-21 een sleutelrol bij de collageensynthese in de extracellulaire matrix en fibrose en bevordert het de hepatocarcinogenese door hematopoëtische stamcellen te activeren.72,73 Tumorsuppressor-miRNA's in HCC omvatten miRNA-122, miRNA-29, de Let-7-familie en de miRNA-15-familie.De Let-7-familie bestaat uit veel tumorsuppressor-miRNA's die zich richten op de RAS-familie.De miR-15-familie omvat miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 en miR-497, die complementaire sequenties hebben voor bepaalde mRNA's.Bovendien zijn lange niet-coderende RNA's (lncRNA's) en circulaire RNA's (cirRNA's) ook belangrijk voor vroege screening van HCC.lncRNA's vertegenwoordigen de breedste klasse van ncRNA's, inclusief mRNA-achtige ncRNA's, en zijn betrokken bij de pathogenese van veel menselijke ziekten.LncRNA's spelen een regulerende rol in de micro-omgeving van de lever en chronische leverziekte.74 CircRNA's zijn ook een klasse van ncRNA's met meerdere functies bij de regulatie van genexpressie.Onlangs zijn circRNA's beschouwd als diagnostische hulpmiddelen voor HCC.
Circulerend vrij RNA heeft een opmerkelijke stabiliteit, inclusief weerstand tegen temperatuur, pH en RNase, wat de isolatie van fnRNA uit perifeer bloed minder vervelend maakt met behulp van standaard RNA-zuiveringsmethoden.De meest gebruikte methoden zijn NGS, microarray en RT-qPCR.Met NGS kunnen microRNA's door het hele genoom worden gemeten.Deze methode is echter duur en de analyse is niet gestandaardiseerd.RT-qPCR is daarentegen goedkoop, versterkt snel nucleïnezuren en biedt vele voordelen, zoals een hogere gevoeligheid, hogere nauwkeurigheid, een groter dynamisch bereik en minder monsters.Microarrays zijn een andere methode die wordt gebruikt voor miRNA-detectie op basis van gevoelige en specifieke hybridisatie van doel-miRNA's met complementaire DNA-sondes, 75 maar analyse van microarray-gegevens is tijdrovend.
Van circulerende miR-122 en Let-7 is gemeld dat ze mogelijk nuttig zijn bij het diagnosticeren van HCC in een vroeg stadium bij risicogroepen, markers bij patiënten met HBV-geassocieerde premaligne knobbeltjes en HCC in een vroeg stadium.76 Cai et al.ontdekte dat leden van de Let-7-familie (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 en miR-199a/b) een risico lopen op chronische HCC bij patiënten met hepatitis.De Let-7-familie kan dienen als een effectieve surrogaatbiomarker voor het voorspellen van de ontwikkeling van HCC in risicogroepen die geassocieerd zijn met chronische hepatitis C. 77 miR-122 heeft een hoge diagnostische nauwkeurigheid bij het detecteren van vroege HCC bij patiënten met levercirrose.78 Het serum dat MiR-107 circuleert, is ook geëvalueerd in de vroege stadia van HCC, 79 en heeft een goed potentieel aangetoond bij populaties met een hoog risico.Zhou et al meldden dat een panel van miRNA's (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a en miR-801) HCC kan onderscheiden van chronische hepatitis B (CHB) en cirrose sensitiviteit was respectievelijk 79,1% en 75% en specificiteit 76,4% en 91,1%.80 In HBV-gerelateerde HCC vonden we dat miR150-spiegels significant verlaagd waren in vergelijking met die bij chronische HBV-patiënten zonder HCC (gevoeligheid 79,1%, specificiteit 76,5%).-224 was verhoogd in HCC vergeleken met gezonde controles, en subgroepanalyses lieten hogere niveaus zien bij patiënten met HCC geassocieerd met HBV.hepatitis B-geassocieerde cirrose en HCC-patiënten identificeerden een siRNA-classificator die zeven differentieel tot expressie gebrachte siRNA's bevat die HCC in verschillende controles kunnen detecteren;AUC-bereik bij vroege screening is beter dan AFP-vrijwilligers.Ze ontdekten dat vier miRNA's (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p en miR-365a-3p) patiënten met HCC konden onderscheiden van patiënten zonder HCC.Vijf tot overexpressie brengende miRNA's (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p en miR-148a-3p) worden beschouwd als potentiële HBV-infecties bij HCC-, cirrose- en CHB-biomarkers, vooral miR-34a-5p kunnen biomarkers zijn voor levercirrose,85 en kunnen potentiële biomarkers zijn voor vroege screening van HCC in populaties met een hoog risico.Het meest bestudeerde lncRNA in HCC wordt sterk geactiveerd bij leverkanker (HULC).Andere studies hebben aangetoond dat HULC dat circuleert bij HCC-patiënten kan worden gebruikt als diagnostische marker omdat dit lncRNA sterk opgereguleerd is bij HCC-patiënten in vergelijking met gezonde individuen.71,86 Onder andere lnRNA's wordt LINC00152 beschouwd als het beste diagnostische lncRNA vanwege de hoge AUC, gevoeligheid en specificiteit.86 In één onderzoek nam de perifere bloedexpressie van LINC00152 geleidelijk toe van normale gezonde controles tot patiënten met CHB en cirrose, en was uiteindelijk het hoogst in HCC.Studies naar de expressie van circSMARCA5 in het plasma van patiënten met HCC hebben een progressieve afname van de expressie van HCC aangetoond, variërend van hepatitis tot cirrose en precancereuze laesies.87 Analyse van ROC-curves bevestigde het potentieel van deze circRNA's om patiënten met hepatitis of levercirrose te onderscheiden van patiënten met HCC, vooral die met AFP-waarden onder 200 ng/ml.Bovendien analyseerde Zhu 13.617 cyclische RNA's in plasmamonsters van HBV-geassocieerde HCC-patiënten en bevestigde dat 6 cyclische RNA's verschillend tot expressie werden gebracht in HCC en HBV-geassocieerde cirrose, wat suggereert dat cRNA's gunstig kunnen zijn.markers voor vroege screening van risicogroepen zoals die geassocieerd met leverziekte, sclerosepatiënten.88
Exosomen zijn membraanblaasjes met een diameter van 40-160 nm;meerdere intracellulaire blaasjes versmelten met het celmembraan en komen vrij in de extracellulaire matrix.Ze bevatten veel actieve componenten, waaronder lipiden, eiwitten, RNA en DNA, en spelen een sleutelrol in de communicatie tussen cellen, zowel HCC- als niet-HCC-cellen.89,90 Exosomen reguleren de progressie van HCC door hepatocytfibroblasten en stellaatcellen, immuuncellen, normale hepatocyten en HCC-cellen te activeren.91 In de micro-omgeving van tumoren produceren tumorcellen een groot aantal exosomen die van kankercellen naar onrijpe cellen worden getransporteerd, die op hun beurt betrokken zijn bij oncogenese, afbraak en cellulaire signalering.92 Studies hebben aangetoond dat exosomen oncogenen kunnen overbrengen naar normale cellen tijdens pathologische processen, wat een van de mechanismen kan zijn van tumorinvasie en metastase.93 De rol van exosomen bij kankerprogressie kan dynamisch en specifiek zijn voor het kankertype, 89 Exosomen kunnen worden geïnternaliseerd door aangrenzende of verre cellen om meerdere doelgenen in ontvangende cellen te reguleren die mogelijk betrokken zijn bij intercellulaire communicatie-ionen en cellulaire micro-omgevingsinteracties, ze kunnen bemiddelen cellulaire signalering en metabolisme.94 Kenmerken en dynamische veranderingen van exosoomladingsmoleculen weerspiegelen direct de kenmerken en dynamische veranderingen van ouderlijke tumorcellen,95 wat ook de basis vormt voor het gebruik van exosomen bij de diagnose en prognose van kanker, evenals voor het voorspellen van de individuele respons op antikankertherapie ..96
Traditionele laboratoriummethoden voor het isoleren en analyseren van exosomen zijn complex, meerstaps en tijdrovend, waaronder ultracentrifugatie, filtratie, chromatografie met uitsluiting op grootte, zuivering van immunoaffiniteit, Western-blotting, enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA), PCR en stroomanalyse.geminiaturiseerde systemen en lab-on-a-chip-platforms met behulp van micro/nanotechnologie worden op grote schaal ontwikkeld voor snelle, gemakkelijke in situ isolatie van exosomen.Nanodeeltjes-trackinganalyse (NTA) is een veelgebruikte methode voor het karakteriseren van de grootte en concentratie van exosomen, waaronder methoden zoals magnetische nanodeeltjes en polyhydroxyalkanoaten.Microfluïdische en elektrochemische methoden kunnen ook snel exosomen met hoge opbrengsten detecteren.
Exosomale eiwitten zijn belangrijke markers voor de diagnose van HCC.In de Arbelaiz-studie was het niveau van 98 RasGAP SH3-bindend eiwit (G3BP) en polymere immunoglobulinereceptor (PIGR) significant verhoogd in van HCC afgeleide exosomen, en de vermeende gecombineerde werkzaamheid van de twee eiwitten was superieur aan die van AFP.IJzerstapeling is een belangrijke factor die bijdraagt ​​aan de ontwikkeling van HCC.Tseng meldde dat hepcidine een sleutelrol kan spelen bij resistentie tegen HCC.99 Exosomen afgeleid van de sera van HCC-patiënten hadden een significant hoger aantal kopieën van hepcidine-mRNA-varianten dan hun gezonde tegenhangers, wat suggereert dat hepcidine een nieuwe diagnostische biomarker voor HCC kan zijn.Het 14-3-3ζ-eiwit in exosomen geproduceerd door 100 HCC kan T-celactivering, proliferatie en differentiatie verminderen en kan T-celtransformatie in regulerende T-cellen induceren, resulterend in uitputting van T-cellen.101 Dit wordt ondersteund door verschillende onderzoeken naar het ontwijken van tumoren door immuunsurveillance 102 die kunnen bijdragen aan HCC-tumorigenese.
Naast de aanwezigheid van ecRNA in plasma of serum, kunnen met RNA verrijkte exosomen worden gebruikt voor niet-invasieve realtime-stadiëring bij vroege tumorscreening en om tumorevolutie en respons op therapie te bepalen.Het niveau van exosomaal miRNA-21 in het bloedserum in de HCC-groep was 2,21 keer hoger dan in de CHB-groep en in de HCC-groep was het 5,57 keer hoger dan in de gezonde populatie.In de Wang-studie verhoogden exosomen HCC significant in vergelijking met cirrotische patiënten met AUC-waarden van 0,83 (95% CI 0,74-0,93) en 0,94 (95% CI 0,88-1,00).104 De verkregen gegevens verduidelijkten de betrokkenheid van specifieke exosomale ladingsmoleculen bij de regulatie van oncogenese en HCC-progressie.105 Serumexpressie van miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 en miR-26a is consistent.en metastase, en miR21-spiegels waren veel hoger bij HCC-patiënten dan bij gezonde controles en ook bij CHB-patiënten.102 LncRNA had potentiële diagnostische waarde in HCC.Studies hebben aangetoond dat exosomen die zijn afgeleid van de sera van HCC-patiënten significant hogere niveaus van LINC00161, LINC000635 en lncRNA hebben geactiveerd door transformerende groeifactor-β dan bij patiënten zonder HCC, en deze lncRNA's zijn sterk geassocieerd met TNM-stadium en tumorvolume.110 Conigliaro et al.CD90+ exosomen bleken hoge niveaus van lncRNAH19 tot expressie te brengen, wat de afgifte van vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) en VEGF-R1-receptorproductie aanzienlijk verhoogde, waardoor angiogenese werd gestimuleerd.93 CircRNA's zijn een ander type exosomale ncRNA's - uitgedrukt in lagere maar stabiele niveaus over soorten heen, circRNA's vertonen ook specificiteit voor celtype, weefseltype, ontwikkelingsstadium en regulerende activiteit.111 circRNA's zijn diagnostische biomarkers voor vroege en minimaal invasieve kanker.112 Recente klinische onderzoeken hebben aangetoond dat de specificiteit van individuele miRNA's bij het voorspellen van HCC niet ideaal is.Daarom kan complexe detectie met behulp van meerdere assays (bijv. miR-122 en miR-48a in combinatie met AFP) de identificatie van vroege HCC en de differentiatie van HCC van cirrose verbeteren.100
Patiënten met CHB en levercirrose zijn de meest voorkomende risicogroep voor het ontwikkelen van HCC.Voor groepen met een hoog risico moet, zodra een aanhoudende virologische respons is bereikt, een kosteneffectieve surveillancestrategie op basis van het HCC-risico worden ontwikkeld, en vroege screening is de sleutel tot het verbeteren van de diagnose en behandeling van HCC met een hoge kosten-effectiviteitsratio2 ..Vroegtijdige screeningsmethoden voor kanker hebben veel beperkingen: voor de meeste soorten kanker zijn geen effectieve vroege screeningmethoden ontwikkeld en de therapietrouw is meestal laag.Vergeleken met traditionele vroege screeningsmethoden heeft vloeibare biopsietechnologie duidelijke voordelen: gemak van bemonstering, panrac-detectie, goede reproduceerbaarheid van monsters en effectieve respons op heterogeniteit van tumoren.Gezien de kosteneffectiviteit van de methoden die verband houden met vloeibare biopsie, is het gebruik ervan bij HCC-screening niet routinematig getest.Ondanks vooruitgang in nauwkeurige detectie op moleculair niveau, is vloeistofbiopsie kostbaar om HCC te detecteren bij doelpatiënten, waardoor het wijdverbreide gebruik ervan wordt beperkt in vergelijking met specifieke beeldvormingsprocedures zoals echografie en magnetische resonantiebeeldvorming.113.114 Een eerdere studie toonde echter aan dat vloeibare biopsie een significant voordeel vertoonde in termen van voor kwaliteit gecorrigeerde levensjaren (QALY's).115 De voordelen van vloeibare biopsie bij vroege carcinoom van de maag en nasopharynx zijn ook aangetoond.116,117 De huidige opvatting is dat vloeibare biopsie een aanvulling kan zijn op serumbiomarkers en radiologische screening bij de detectie en diagnose van tumoren.117 118
Volgens de huidige literatuur heeft vloeistofbiopsietechnologie een significant hogere gevoeligheid en specificiteit laten zien bij vroege screening van risicogroepen voor leverkanker.Ongeacht het type vloeistofbiopsie kan het HCC onderscheiden van personen met een hoog risico zonder HCC, wat het belang van vroege screening suggereert, aangezien er duidelijk verschillen zijn tussen personen met een hoog risico en gezonde personen.ctDNA heeft een korte halfwaardetijd en kan worden gebruikt om HCC te detecteren, dus eventuele veranderingen in van tumor afgeleid cDNA kunnen realtime concreet bewijs leveren van tumorprogressie, vooral voor kleine tumoren.Een hoog ctDNA-gehalte duidt op de ontwikkeling en verspreiding van kanker en is een vroege indicator van progressie en recidief.Bovendien kunnen patiënten, op basis van de resultaten van ctDNA, geïndividualiseerde behandeling en follow-up krijgen.119 Specifieke methylatieplaatsen kunnen een betere marker zijn dan AFP voor vroege identificatie van HCC en cirrotische knobbeltjes.In reseceerbare gevallen van HCC zijn hoge niveaus van cDNA indicatief voor microvasculaire invasie en postoperatief recidief en metastase.Veranderingen in het aantal kopieën zijn geassocieerd met de overleving van patiënten met HCC.Er kan worden aangenomen dat cDNA-evaluatie betrokken kan zijn bij de algehele behandeling van HCC, en cDNA kan dienen als een effectieve indicator van therapeutische modulatie.Markers op basis van specifieke genetische mutaties in ctDNA zijn door klinische richtlijnen overgenomen om de werkzaamheid te voorspellen en de resistentie tegen geneesmiddelen te controleren.ctDNA-testen kunnen het meest bruikbare hulpmiddel voor vloeibare biopsie zijn voor vroege screening.CTC's spelen ook een sleutelrol bij de vroege screening van HCC-groepen met een hoog risico.Verschillende markers van HCC-geassocieerde CTC's zijn van bijzonder belang bij het ontstaan, de ontwikkeling en het terugkeren van HCC.Als membraanblaasjes zijn exosomen betrokken bij intercellulaire communicatie, vooral in HCC-cellen.Circulerende microRNA's zijn stabiel in het bloed en kunnen dus nuttiger zijn voor vroege screening van HCC.Geleidelijk werden exosomale eiwitten en RNA-rijke exosomen ontdekt en hun voorspellende werkzaamheid voor HCC werd bevestigd.Interessant is dat verschillende etiologieën van HCC ook geassocieerd kunnen zijn met verschillende mutaties, zodat we verschillende biomarkers kunnen selecteren voor vroege screening op basis van verschillende etiologieën van HCC.120
De huidige vloeistofbiopsietechnieken zijn echter twijfelachtig in termen van stabiliteit en kunnen niet zelfstandig vroege screening of monitoring van HCC uitvoeren, maar kunnen nog steeds een aanvulling vormen op individuele screening en diagnose.121 Als een vorm van vloeibare biopsie hebben de detectie en beeldvorming van ctDNA, CTC, cfRNA en exosoom-geassocieerde AFP of PIVKA-II veelbelovende toepassingen in de vroege diagnose en prognose van HCC.Het exacte mechanisme van ctDNA-afgifte in het bloed moet echter nog worden opgehelderd.Het onthullen van de fundamentele biologische eigenschappen van ctDNA kan het gebruik ervan als marker vergemakkelijken.De kleine hoeveelheid ctDNA in de circulatie en de strikte vereisten voor monsterbehandeling zijn uitdagingen voor de klinische implementatie van cDNA-detectie in HCC.Bovendien hebben genetische mutaties geen specifieke kenmerken die een nauwkeurige identificatie van kankerverwekkende stoffen mogelijk maken.Aangezien er ook meerdere genetische en somatische varianten aanwezig zijn in normale weefsels, kunnen genetische mutaties die worden geïdentificeerd door vloeistofbiopsie van beperkt nut zijn bij vroege screening op HCC.122 De beperkingen van goed gedefinieerde bruikbare gendoelen en biomarkers die helpen cDNA te onderscheiden van niet-tumor-DNA zijn de belangrijkste problemen bij het gebruik van cDNA.gebrek aan bruikbaarheid van gevoelige en specifieke markers voor de detectie van CTC's.Alleen levensvatbare cellen met metastatisch potentieel werden gevonden en de optimale combinatie van CSC-verrijkte markers was onduidelijk.Isolatie van CTC's voor cultuur en evaluatie van hun mutatieprofielen is ook een uitdagende taak.Vanwege problemen met de identificatie, isolatie en zuivering van exosomen is het specifieke moleculaire mechanisme nog steeds onduidelijk, en eerdere studies over het mechanisme van exosomen en HCC zijn niet diepgaand geweest, en de manier waarop miRNA's, lncRNA's en eiwitten worden gesorteerd in exosomen en het is niet duidelijk of opname door exosoom een ​​specifiek type proces is.Het gebruik van exosomen voor de diagnose en behandeling van HCC bevindt zich nog in het preklinische stadium.Het gebrek aan standaardisatie van procedures voor vloeibare biopsie, zoals het type buisjes dat wordt gebruikt om bloed te verzamelen, het bloedvolume, de opslag en detectie van monsters, isolatie en verrijking, kan het gebruik ervan in de dagelijkse klinische praktijk uitsluiten vanwege verschillen in praktijken tussen medische centra.De werkzaamheid van vloeibare biopsie bij vroege screening, diagnose, evaluatie van de werkzaamheid en voorspelling van HCC moet nog worden onderzocht, vooral voor groepen met een hoog risico.Vloeibare biopsietechnologie heeft een groot potentieel en zal naar verwachting in de nabije toekomst op grote schaal worden gebruikt in de klinische praktijk van leverkanker.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN schat de incidentie en mortaliteit van 36 soorten kanker in 185 landen.CA Kanker J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Hoofdkwartier van de National Health Commission.Criteria voor de diagnose en behandeling van primaire leverkanker (editie 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38 (2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Richtlijnen voor de diagnose en behandeling van hepatocellulair carcinoom (editie 2019).Leverkanker.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Richtlijnen voor de klinische praktijk voor hepatocellulair carcinoom: Japanese Society for Liver Diseases, 2017 (JSH-HCC 4e richtlijnen), update 2019.Leverziekte reservoir.2019;49(10):1109-1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Vloeibare biopsie bij chronische leverziekte.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Vloeibare borstkankerbiopsie: een gerichte beoordeling.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678-686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Surveillance voor hepatocellulair carcinoom: huidige best practices en toekomstige richtingen.Gastro-enterologie.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, Europese organisatie R, C Therapeutics.Klinische richtlijnen EASL-EORTC: behandeling van hepatocellulair carcinoom.J Heparine.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Gecombineerde analyse van AFP en HCCR-1 als bruikbare serologische markers bij klein hepatocellulair carcinoom: een prospectieve cohortstudie.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Differentiële expressie van plasma-microRNA-125b bij met hepatitis B-virus geassocieerde leverziekte en diagnostisch potentieel van door hepatitis B-virus geïnduceerd hepatocellulair carcinoom.Leverziekte reservoir.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologie en betekenis van alfa-fetoproteïne bij hepatocellulair carcinoom.Lever int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Klinische richtlijnen voor de behandeling van hepatocellulair carcinoom in de regio Azië-Pacific: update 2017.Internationale organisatie voor leverziekten.2017;11(4):317-370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Diagnostische waarde van serum PIVKA-II alleen of in combinatie met AFP bij Chinese patiënten met hepatocellulair carcinoom.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Niet-kleincellige longkanker non-plasma humorale vloeistofbiopsie: dichter bij de tumor!cel.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Vloeibare biopsie: huidige status en toekomstperspectieven.Behandeling Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Op vloeistof gebaseerde kankerbiopsie: een multimodaal diagnostisch hulpmiddel in de klinische oncologie.De Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nucleïnezuren in menselijk plasma.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Geavanceerde detectie van circulerend tumor-DNA door analyse van de fragmentgrootte.Wetenschap vertaalt geneeskunde.2018;10:466.doi: 10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Lengte van het circulerende tumor-DNA-fragment.PLOS-genen.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Circulerend tumor-DNA: een veelbelovende biomarker in op vloeistof gebaseerde kankerbiopsie.doel tumor.2016;7(30):48832-48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detectie van circulerend tumor-DNA in vroege en late stadia van menselijke maligniteiten.Wetenschap vertaalt geneeskunde.2014;6(224):224ra24.doi: 10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Vloeibare biopsie voor voorspellende mutatieanalyse van solide kanker: het perspectief van een patholoog.J Biotechnologie.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Vroege tumordetectie door DNA-screening in circulerend plasma: hype of hoop?Belgisch klinisch recht.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Effect van hepatitisvirus en veroudering op DNA-methylatie bij menselijke hepatocarcinogenese.Histopathologie.2010;25(5):647-654.doi: 10.14670/HH-25.647


Posttijd: 23 september-2022